肉的宰后嫩化最主要归因于肌原玻璃玻璃纤维棉构成的影响，肌原玻璃玻璃纤维棉构成是由内源性球球血清酶溶解酶生物光降解肌原玻璃玻璃纤维棉和组织神经元膜系骨架球球血清酶会导致的。与几百年来一直以来都是大家关注视角的钙球球血清酶酶不同于，胱天球球血清酶酶（caspases）前段时间当上感想法得话题。胱天球球血清酶酶在组织神经元膜系凋亡的执行力过程起着至关最重要的功效，另外caspase-3在人死了球球血清酶溶解中的功效是各等方面和缜密的，为此比较适合进一大步理论探究。S-亚硝基化完成上下跌整钙增加、精力代谢率、球球血清酶质生物光降解和组织神经元膜系凋亡来上下跌整肉嫩，还包括嫩度和持水效率。刚开始理论探究看见S-亚硝基化就可以下跌依耐线粒体的caspase-3级联现象，这也许是腹肌组织神经元膜系凋亡和牛肉片品质保证不同的因素。caspase-3的理论探究内容是其与组织神经元膜系凋亡的有关，只不过，少许有理论探究浅论S-亚硝基化上下跌整caspase-3的规则。

2024年9月由成都现代农业上大学张万刚教学团对在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱海洋生物为该研究提供了亚硝基化表达组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

常常标题格式：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

中文核心期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202多年应响分子：5.7

展现时光：2024年9月

老客户组织：南京农业大学

探讨物料：蛋白

拜谱打造系统：亚硝基化修饰组学

系统路线规划：

一、研发最后

01.Caspase-3可溶性

近几年尚不模糊NO对caspase-3的可抑做成用是不是归因于NO介导的S-亚硝基化，有差异溶液浓度均值的GSNO是 外源性NO提供，以引诱caspase-3的身体S-亚硝基化。結果揭示，与如果没有GSNO的组相对来说，100、200和400μM GSNO组的caspase-3活力性同质性调低（图1），与原先报道怎么写高度。GSNO整理调低caspase-3活力性的不确定性诱因仍亟待具体分析。

图1 不同的盐浓度的GSNO补救对caspase-3活性酶类的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化方面

探究Caspase-3的亚硝基化层面，以指出GSNO对Caspase-3的想法性。经GSNO加工处理后，加测到caspase-3淀粉酶S-亚硝基化屈服强度增大（图2）。这一些报告发现，外源性GSNO养育可顺利完成诱导型caspase-3的休外S-亚硝基化。惹人大吃一惊的是，在就没有GSNO会出现的参考组中加测到一两个变弱的S-亚硝基化带，这发现caspase-3也许 发生内源性的S-亚硝基化。与此同时，本探究中caspase-3的S-亚硝基化层面较高，而caspase-3的生物变低，这与之间的探究共同。同时，caspase-3的特异形S-亚硝基化表达位点尚不知晓，还想要进三步的经历。

图2 GSNO除理对caspase-3S-亚硝基化水平面的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化突显组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码队列。蓝图标的编码队列表达出来S-亚硝基化肽，鲜红色图标的C表达出来S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3分解结淀粉酶

结血清做另外一种更更重要的癌神经细胞骨架血清，在长期保持肌癌神经细胞成分特征的成分特征全面性和内缩性领域起着更更重要的作用，研究探讨S-亚硝基化caspase-3对结血清光生物降解的太敏理想化具更更重要功用。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的初始值肌仟维血清）组想必，0 μM GSNO组（肌原仟维和caspase-3的孵育，无GSNO）的全面结血清纯度有效降低了，信息提示caspase-3对结血清具自身的血清水解反应业务能力。在GSNO孵育后，全面结血清的纯度非常明显提高（P < 0.05）。不仅如此，当GSNO浓度值提高时，全面结血清的纯度不断调涨（P < 0.05）（图5）。这类感觉发现，SNO淡化的caspase-3以情况依赖性的的方法能够抑制结血清的光生物降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结球蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3降解塑料肌钙球蛋白-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清上下调整复杂力量内缩的丝条的须要肌原弹性食物纤维棉蛋清。TnT的光生物挥发特征英文是查重到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化水平下，caspase-3对TnT的光生物挥发问题图甲6下图，与Std组（只含caspase-3和GSNO的肌原弹性食物纤维棉）较之，caspase-3组中30 kDa TnT片断有效加强，说明caspase-3参与的了TnT的光生物挥发，前者，caspase-3与GSNO的孵育会造成30 kDa TnT走低。在100和200 μM GSNO组两者之间没查重到显著性的的地域差异(P > 0.05)，而当GSNO的溶度高达400 μM 时，该片断有效仰制(P < 0.05)。这察觉到说明了SNO淡化的caspase-3对TnT光生物挥发的仰生产用。结蛋清和TnT是caspase-3的神经敏感底物，而GSNO解决大大减少caspase-3的亲水性将会造成肌原弹性食物纤维棉蛋清光生物挥发层度大大减少。与此同时上述，NO诱骗的S-亚硝基化也可以采用淡化半胱氨酸残基来上下调整caspase-3的亲水性，继而进这一步导致其对结蛋清和TnT的蛋清淀粉水解力量，进而导致牛肉片品级。

图6. S-亚硝基化caspase- 3挥发肌钙蛋白质-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结

本探索契机研讨S-亚硝基化对caspase-3突显的反应试述然后对牛羊肉肌原棉纤维棉体内生物降解的反应。球蛋白质质S-亚硝基化也可以突显caspase-3的半胱氨酸残基，而造成 caspase-3可溶性调低，进两步减缓了其对牛羊肉肌原棉纤维棉球蛋白质质的球蛋白质质溶解性能。

三、拜谱个人心得体会

科研利用了酶活法测定，亚硝基化突显组学浅析，WB等检测工具伎俩，察觉到血清酶酶S-亚硝基化就能够突显caspase-3的半胱氨酸残基，这使得了caspase-3渗透性的缩减，齐头并进一个步骤治理和改善了其对牛肉片肌原纤维棉血清酶酶的血清酶酶水解反应功能。本科研为说明血清酶酶质亚硝基化对肉质地的监测共识机制可以提供新一个新的第一人称视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、遮盖淀粉酶质组学、分泌组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸系类服务，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺酸性反应、total氧化的保存、解离巯基，欢迎大家咨询！

参看医学文献：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663